柱壓與硅膠基質(zhì)的形態(tài)(如無(wú)定形或球形硅膠)、顆粒大小、填料合成條件、裝柱條件、所用流動(dòng)相和分析時(shí)的溫度有關(guān)。不同廠(chǎng)家的色譜柱柱壓會(huì )有所差別,相同流動(dòng)相和溫度的條件下,不同廠(chǎng)家的新色譜柱有的柱壓可能相差4、5個(gè)MPa,特別是低端和色譜柱之間,這一區別比較明顯。這是由色譜柱廠(chǎng)家所選用的硅膠基質(zhì)及其生產(chǎn)條件決定的,這種差異的存在是正常的。同時(shí)需要說(shuō)明的一點(diǎn)是,柱壓與柱效有一定的關(guān)系,通常柱效高的色譜柱柱壓相對而言會(huì )高一點(diǎn),但柱壓高的色譜柱并不一定就具有高柱效。
在色譜柱的使用過(guò)程中柱壓通常會(huì )出現兩種升高的形式:
*種是,隨著(zhù)使用時(shí)間的延長(cháng)色譜柱柱壓慢慢上升,這是正常的;
第二種是,使用過(guò)程中(流動(dòng)相和溫度沒(méi)有改變的條件下)色譜柱壓力突然升高很多。這種壓力突然升高的現象,通常是由工作人員操作不當引起的,
原因:1)樣品太臟,使用前沒(méi)有過(guò)濾,導致柱篩板堵塞.
2)樣品含有的雜質(zhì)在流動(dòng)相中的溶解性不是很好,與流動(dòng)相混合后析出,導致柱塞板堵塞。
3)使用緩沖鹽,處理錯誤,緩沖鹽在色譜柱中析出,堵塞塞板和鍵合相顆粒之間的孔隙。
解決辦法
對于第二種,即柱壓突然升高的情況,通常有以下幾種解決辦法:
1)將色譜柱反接,用含水比例較大的流動(dòng)相進(jìn)行沖洗,沖洗時(shí)點(diǎn)。
2)色譜柱進(jìn)樣一端的篩板取下,分別放在水中和甲醇中超聲或更換新的柱篩板。如果柱效沒(méi)變,但柱壓仍然較高,則應考慮進(jìn)樣端填料受污染的問(wèn)題,因此除了取下進(jìn)樣端篩板超聲外,還需要挖掉進(jìn)樣端的部分填料,挖去填料之前先檢查一下填料的顏色,如果填料的顏色發(fā)生了變化,則應該挖掉直到見(jiàn)到白色的填料為止。
挖掉后色譜柱將出現一個(gè)缺口,填補缺口的填料可以從另一支相同品牌、相同型號的報廢色譜柱的出口端獲得,填料用有機溶劑如甲醇等調成糊狀裝入缺口處,壓緊刮平,再裝上篩板. 液相色譜系統中氣泡對檢測的影響及其解決方法 在我們進(jìn)行液相色譜分析時(shí),有時(shí)會(huì )遇到這樣一個(gè)問(wèn)題:系統的流路中存在氣泡.
由于氣泡的存在,會(huì )造成色譜圖上出現尖銳的噪聲峰,嚴重時(shí)會(huì )造成分析靈敏度下降;氣泡變大進(jìn)入流路或色譜柱時(shí)會(huì )使流動(dòng)相的流速變慢或不穩定,使基線(xiàn)起伏. 造成上述現象的主要原因有三條:一是流動(dòng)相溶液中往往因溶解有氧氣或混入了空氣而形成氣泡;二是系統開(kāi)始工作時(shí)未能將流路中的空氣驅趕干凈;三是在注入樣品時(shí)不注意混入了空氣. 為了避免這類(lèi)問(wèn)題的出現,液相色譜實(shí)際分析過(guò)程中必須重視對流動(dòng)相進(jìn)行脫氣處理。
柱子使用經(jīng)驗談:
色譜柱在使用前,進(jìn)行柱的性能測試,并將結果保存起來(lái),作為今后評價(jià)柱性能變化的參考。但要注意:柱性能可能由于所使用的樣品、流動(dòng)相、柱溫等條件的差異而有所不同;另外,在做柱性能測試時(shí)是按照色譜柱出廠(chǎng)報告中的條件進(jìn)行(出廠(chǎng)測試所使用的條件是*條件),只有這樣,測得的結果才有可比性.
1、樣品的前處理:
a、使用流動(dòng)相溶解樣品。
b、使用予處理柱除去樣品中的強極性或與柱填料產(chǎn)生不可逆吸附的雜質(zhì)。 c、使用0.45µm的過(guò)濾膜過(guò)濾除去微粒雜質(zhì)。
2、流動(dòng)相的配制:
液相色譜是樣品組分在柱填料與流動(dòng)相之間質(zhì)量交換而達到分離的目的,因此要求流動(dòng)相具備以下的特點(diǎn):
a、流動(dòng)相對樣品具有一定的溶解能力,保證樣品組分不會(huì )沉淀在柱中(或長(cháng)時(shí)間保留在柱中)。
b、流動(dòng)相具有一定惰性,與樣品不產(chǎn)生化學(xué)反應(特殊情況除外)。
c、流動(dòng)相的黏度要盡量小,以便在使用較長(cháng)的分析柱時(shí)能得到好的分離效果;同時(shí)降低柱壓降,延長(cháng)液體泵的使用壽命(可運用提高溫度的方法降低流動(dòng)相的黏度)。
d、流動(dòng)相的物化性質(zhì)要與使用的檢測器相適應。如使用UV檢測器,使用對紫外吸收較低的溶劑配制。
e、流動(dòng)相沸點(diǎn)不要太低,否則容易產(chǎn)生氣泡,導致實(shí)驗無(wú)法進(jìn)行。
f、在流動(dòng)相配制好后,一定要進(jìn)行脫氣。除去溶解在流動(dòng)相中的微量氣體既有利于檢測,還可以防止流動(dòng)相中的微量氧與樣品發(fā)生作用。
3、流動(dòng)相流速的選擇:
因柱效是柱中流動(dòng)相線(xiàn)性流速的函數,使用不同的流速可得到不同的柱效。對于一根特定的色譜柱,要追求*柱效,使用*流速。對內徑為4.6mm的色譜柱,流速一般選擇1ml/min,對于內徑為4.0mm柱,流速0.8ml/min為佳。 當選用*流速時(shí),分析時(shí)間可能延長(cháng)??刹捎酶淖兞鲃?dòng)相的洗滌強度的方法以縮短分析時(shí)間(如使用反相柱時(shí),可適當增加甲醇或乙腈的含量)。
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