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液相色譜柱的使用方法

更新時(shí)間:2016-11-17      點(diǎn)擊次數:1912

     “色譜是一種分離分析手段,分離是核心,因此,擔負分離作用的色譜柱是色譜系統的心臟。色譜柱由柱管、壓帽、卡套(密封環(huán))、篩板(濾片)、接頭、螺絲等組成,沒(méi)有色譜柱就不能進(jìn)行分離、定性與定量了,色譜柱是根據柱子里的填充物不同來(lái)區別的,填充物又是根據需要分離的物質(zhì)的極性來(lái)選擇的。

1.色譜柱的使用說(shuō)明:

(1)色譜柱使用前注意事項:

     色譜柱的儲存液無(wú)特殊說(shuō)明,均為評價(jià)報告所示的流動(dòng)相。在使用前,一定要注意色譜柱的儲存液與要分析樣品的流動(dòng)相是否互溶。在反相色譜中,如,用高濃度的鹽或緩沖液作洗脫劑,應先用10%左右的低濃度的有機相洗脫劑過(guò)渡一下,否則緩沖液中的鹽在高濃度的有機相中很容易析出,堵塞色譜柱。

 (2)流動(dòng)相:

     流動(dòng)相中所使用的各種有機溶劑要盡可能使用色譜純,配流動(dòng)相的水是超純水或全玻璃器皿的雙蒸水。如果將所配得流動(dòng)相再經(jīng)過(guò)0.45μm的濾膜過(guò)濾一次則更好,尤其是含鹽的流動(dòng)相。另外,裝流動(dòng)相的容器和色譜系統中的在線(xiàn)過(guò)濾器等裝置應該定期清洗或更換。以常規硅膠為基質(zhì)的鍵合相填料通常的pH值適用范圍是2.0~8.0,BDSC18適合于堿性化合物,pH值適用范圍為2.0~10.0。當必須要在pH值適用范圍的邊界條件下使用色譜柱時(shí),每次使用結束后立即用適合于色譜柱儲存并與所使用的流動(dòng)相互溶的溶劑清洗,并*置換掉原來(lái)所使用的流動(dòng)相。

 (3)樣品:

     樣品也要盡可能清潔,可選用樣品過(guò)濾器或樣品預處理柱(SPE)對樣品進(jìn)行預處理;

 若樣品不便處理,要使用保護柱,在用正相色譜法分析樣品時(shí),所有的溶劑和樣品應嚴格脫水。

  

2.色譜柱的保存:

 (1)反相色譜柱每天實(shí)驗后的保養:

     使用緩沖液或含鹽的流動(dòng)相,實(shí)驗完成后應用10%的甲醇/水沖洗30分鐘,洗掉色譜柱中的鹽,再用甲醇沖洗30分鐘。注意:不能用純水沖洗柱子,應該在水中加入10%的甲醇,防止將填料沖塌陷。

 (2)長(cháng)期保存色譜柱:

     如果色譜柱要長(cháng)時(shí)間保存,必須存于合適的溶劑下。對于反相柱可以?xún)Υ嬗诩兗状蓟蛞译嬷?,正相柱可以?xún)Υ嬗趪栏衩撍蟮募冋和橹?,離子交換柱可以?xún)Υ嬗谒ê栏瘎?或柳硫汞)中,并將購買(mǎi)新色譜柱時(shí)附送的堵頭堵上,儲存的溫度是室溫。

  

3.色譜柱的再生因為色譜柱是消耗品,隨著(zhù)使用時(shí)間或進(jìn)樣次數的增加,會(huì )出現色譜峰高降低,峰寬加大或出現肩峰的現象,一般來(lái)說(shuō)可能是柱效下降。

 (1)反相柱的再生:

     依次采用20~30倍的色譜柱體積的甲醇:水=10:90(V/V),乙腈,異丙醇作為流動(dòng)相沖洗色譜柱,完成后再以相反順序沖洗色譜柱。

 (2)正相柱的再生:

     依次以20~30倍色譜柱的體積的正己烷、異丙醇、二氯甲烷、甲醇作為流動(dòng)相沖洗色譜柱,然后再以相反的順序沖洗色譜柱。要注意上述溶劑必須嚴格脫水。

 

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