液相色譜柱的使用方法

     “色譜是一種分離分析手段，分離是核心，因此，擔負分離作用的色譜柱是色譜系統的心臟。色譜柱由柱管、壓帽、卡套（密封環(huán)）、篩板（濾片）、接頭、螺絲等組成，沒(méi)有色譜柱就不能進(jìn)行分離、定性與定量了，色譜柱是根據柱子里的填充物不同來(lái)區別的，填充物又是根據需要分離的物質(zhì)的極性來(lái)選擇的。

1.色譜柱的使用說(shuō)明：

（1）色譜柱使用前注意事項：

     色譜柱的儲存液無(wú)特殊說(shuō)明，均為評價(jià)報告所示的流動(dòng)相。在使用前，一定要注意色譜柱的儲存液與要分析樣品的流動(dòng)相是否互溶。在反相色譜中，如，用高濃度的鹽或緩沖液作洗脫劑，應先用10％左右的低濃度的有機相洗脫劑過(guò)渡一下，否則緩沖液中的鹽在高濃度的有機相中很容易析出，堵塞色譜柱。

 （2）流動(dòng)相：

     流動(dòng)相中所使用的各種有機溶劑要盡可能使用色譜純，配流動(dòng)相的水是超純水或全玻璃器皿的雙蒸水。如果將所配得流動(dòng)相再經(jīng)過(guò)0.45μm的濾膜過(guò)濾一次則更好，尤其是含鹽的流動(dòng)相。另外，裝流動(dòng)相的容器和色譜系統中的在線(xiàn)過(guò)濾器等裝置應該定期清洗或更換。以常規硅膠為基質(zhì)的鍵合相填料通常的pH值適用范圍是2.0～8.0，BDSC18適合于堿性化合物，pH值適用范圍為2.0～10.0。當必須要在pH值適用范圍的邊界條件下使用色譜柱時(shí)，每次使用結束后立即用適合于色譜柱儲存并與所使用的流動(dòng)相互溶的溶劑清洗，并*置換掉原來(lái)所使用的流動(dòng)相。

 （3）樣品：

     樣品也要盡可能清潔，可選用樣品過(guò)濾器或樣品預處理柱（SPE）對樣品進(jìn)行預處理；

 若樣品不便處理，要使用保護柱，在用正相色譜法分析樣品時(shí)，所有的溶劑和樣品應嚴格脫水。

2.色譜柱的保存：

 （1）反相色譜柱每天實(shí)驗后的保養：

     使用緩沖液或含鹽的流動(dòng)相，實(shí)驗完成后應用10%的甲醇/水沖洗30分鐘，洗掉色譜柱中的鹽，再用甲醇沖洗30分鐘。注意：不能用純水沖洗柱子，應該在水中加入10%的甲醇，防止將填料沖塌陷。

 （2）長(cháng)期保存色譜柱：

     如果色譜柱要長(cháng)時(shí)間保存，必須存于合適的溶劑下。對于反相柱可以?xún)Υ嬗诩兗状蓟蛞译嬷?，正相柱可以?xún)Υ嬗趪栏衩撍蟮募冋和橹?，離子交換柱可以?xún)Υ嬗谒ê栏瘎?或柳硫汞）中，并將購買(mǎi)新色譜柱時(shí)附送的堵頭堵上，儲存的溫度是室溫。

3.色譜柱的再生因為色譜柱是消耗品，隨著(zhù)使用時(shí)間或進(jìn)樣次數的增加，會(huì )出現色譜峰高降低，峰寬加大或出現肩峰的現象，一般來(lái)說(shuō)可能是柱效下降。

 （1）反相柱的再生：

     依次采用20～30倍的色譜柱體積的甲醇：水=10：90（V/V），乙腈，異丙醇作為流動(dòng)相沖洗色譜柱，完成后再以相反順序沖洗色譜柱。

 （2）正相柱的再生：

     依次以20～30倍色譜柱的體積的正己烷、異丙醇、二氯甲烷、甲醇作為流動(dòng)相沖洗色譜柱，然后再以相反的順序沖洗色譜柱。要注意上述溶劑必須嚴格脫水。