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液相色譜柱使用注意事項

更新時(shí)間:2017-04-01      點(diǎn)擊次數:1737

(1)液相色譜柱色譜柱使用前注意事項:

    液相色譜柱的儲存液無(wú)特殊說(shuō)明,均為評價(jià)報告所示的流動(dòng)相。在使用前,一定要注意液相色譜柱的儲存液與要分析樣品的流動(dòng)相是否互溶。在反相色譜中,如用高濃度的鹽或緩沖液作洗脫劑,應先用10%左右的低濃度的有機相洗脫劑過(guò)渡一下,否則緩沖液中的鹽在高濃度的有機相中很容易析出,堵塞色譜柱。

(2)流動(dòng)相:

   流動(dòng)相中所使用的各種有機溶劑要盡可能使用色譜純,配流動(dòng)相的水是超純水或全玻璃器皿的雙蒸水。如果將所配得流動(dòng)相再經(jīng)過(guò)0.45μm的濾膜過(guò)濾一次則更好,尤其是含鹽的流動(dòng)相。另外,裝流動(dòng)相的容器和色譜系統中的在線(xiàn)過(guò)濾器等裝置應該定期清洗或更換。

  以常規硅膠為基質(zhì)的鍵合相填料通常的pH值適用范圍是2.0-8.0。當必須要在pH值適用范圍的邊界條件下使用色譜柱時(shí),每次使用結束后立即用適合于色譜柱儲存并與所使用的流動(dòng)相互溶的溶劑清洗,并*置換掉原來(lái)所使用的流動(dòng)相。

(3)樣品:

   樣品也要盡可能清潔,可選用樣品過(guò)濾器或樣品預處理柱(spe)對樣品進(jìn)行預處理;若樣品不便處理,要使用保護柱。在用正相色譜法分析樣品時(shí),所有的溶劑和樣品應嚴格脫水。

 

色譜柱的保存

(1)反相液相色譜柱色譜柱每天實(shí)驗后的保養:

   使用緩沖液或含鹽的流動(dòng)相,實(shí)驗完成后應用10%的甲醇/水沖洗30分鐘,洗掉色譜柱中的鹽,再用甲醇沖洗30分鐘。注意:不能用純水沖洗柱子,應該在水中加入10%的甲醇,防止將填料沖塌陷。

(2)長(cháng)期保存色譜柱:

   如色譜柱要長(cháng)時(shí)間保存,必須存于合適的溶劑下。對于反相柱可以?xún)Υ嬗诩兗状蓟蛞译嬷?,正相柱可以?xún)Υ嬗趪栏衩撍蟮募冋和橹?,離子交換柱可以?xún)Υ嬗谒ê栏瘎?或柳硫汞)中,并將購買(mǎi)新色譜柱時(shí)附送的堵頭堵上。儲存的溫度是室溫。

 

色譜柱在使用過(guò)程中易出現的問(wèn)題和解決辦法

   色譜柱在使用中zui常見(jiàn)的問(wèn)題就是柱壓升高,如果柱壓是在長(cháng)時(shí)間使用過(guò)程中緩慢增加,屬于正?,F象,但柱壓在使用過(guò)程中突然升高(系統管路堵塞及壓力傳感器故障除外),可能的原因有如下幾點(diǎn):

(1)色譜柱頭的過(guò)濾篩板堵塞或污染;

(2)色譜柱頭的填料被樣品污染;

(3)色譜柱內緩沖液中的鹽遇到高濃度的甲醇或其他有機溶劑,形成結晶析出;

(4)流動(dòng)相pH值過(guò)大或過(guò)小使固定相結構破壞或溶解。

 

解決辦法如下:

(1)如確定是色譜柱頭的過(guò)濾篩板被污染,可以將色譜柱反方向用甲醇沖洗至正常壓力,或者卸下色譜柱頭,將其放在10%的稀硝酸內超聲清洗10分鐘,后再用純水超聲10分鐘,重新裝入色譜柱。

(2)如確定色譜柱頭的填料被污染,將柱頭螺絲卸下,挖出柱內前段被污染的填料,用相同的柱填料重新填入,仔細修復后,重新安裝上柱頭螺絲。

(3)如確定定是鹽結晶,用10%的甲醇/水沖洗色譜柱使柱內鹽全部溶解,再換高濃度甲醇。

(4)如果因pH值使用不當,很難恢復。

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