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色譜峰保留時(shí)間變化常見(jiàn)原因和解決方法

更新時(shí)間:2017-03-28      點(diǎn)擊次數:4604

   確定色譜峰保留時(shí)間不穩定的原因首先需要找出變化的模式。保留時(shí)間在多次進(jìn)樣間隨機變化。建議首先檢查泵和溶劑混合裝置。校驗泵是否工作正常,可以用量筒和秒表來(lái)測量流速。校驗流動(dòng)相組成沒(méi)有變化,可以在流動(dòng)相中加入跟蹤劑來(lái)觀(guān)察基線(xiàn)的變化。如果流動(dòng)相組成是穩定的,基線(xiàn)也應該很穩定。如果流動(dòng)相組成有變化,你會(huì )觀(guān)察到基線(xiàn)的相應變化。舉例說(shuō)明,如果你使用反相條件,UV檢測器,可以在有機相溶劑中加入0.1%的丙酮,監測254 nm下的基線(xiàn)變化。另一種方法也可以,你需要人工配制流動(dòng)相,然后通過(guò)溶劑混合裝置。如果保留時(shí)間的變化消失了,問(wèn)題就出在溶劑混合裝置上。

 一天之內的進(jìn)樣保留時(shí)間一致,但是不同天數之間的保留時(shí)間變化

   這種情況下,儀器本身不太可能有問(wèn)題。保留時(shí)間變化zui有可能的原因是流動(dòng)相組成的變化。在反相色譜中,保留因子k和流動(dòng)相中有機溶劑的體積含量成指數關(guān)系。根據經(jīng)驗,如果有機溶劑含量誤差1%,那么保留時(shí)間的變化在5%到15%之間,典型情況在10%左右。建議仔細稱(chēng)量有機溶劑,的配制流動(dòng)相方法是用質(zhì)量稱(chēng)量代替體積稱(chēng)量。

   此外,流動(dòng)相如何脫氣也可能導致保留時(shí)間的變化。的脫氣方法是使用真空超聲脫氣大約一分鐘左右,這會(huì )zui大程度的減少溶劑蒸汽的揮發(fā)。另一個(gè)方法是用氦氣流噴射,在流動(dòng)相被氦氣平衡后,氦氣流必須被關(guān)閉,否則氦氣會(huì )帶走溶劑蒸汽,溶劑的組成會(huì )由于蒸發(fā)而發(fā)生變化。

    如果樣品組成是離子狀態(tài)或者離子化的,那么控制流動(dòng)相的pH值非常重要。小到0.1單位的pH變化會(huì )導致保留時(shí)間漂移10%左右。所以準確測量pH值并保證pH儀被很好地的校準。在反相色譜中,隨著(zhù)流動(dòng)相pH值的升高,酸保留時(shí)間會(huì )減少,堿的保留時(shí)間會(huì )增加。

  

色譜峰保留時(shí)間朝同一個(gè)方向漂移

    如果所有色譜峰的保留時(shí)間都朝同一個(gè)方向漂移,很可能是溫度原因所致。根據經(jīng)驗,每℃的變化導致保留時(shí)間變化大約1%到2%左右。在通常情況下沒(méi)有什么問(wèn)題,但是在許多地方空調和暖氣在周末的時(shí)候會(huì )關(guān)閉,然后會(huì )出現樣品在周末的保留時(shí)間會(huì )和平時(shí)不一樣。使用柱溫箱可以很好的避免這個(gè)問(wèn)題。

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