液相色譜常見(jiàn)故障問(wèn)題

1.HPLC靈敏度不夠的主要原因及解決辦法是什么？

①樣品量不足，解決辦法為增加樣品量

②樣品未從柱子中流出?？筛鶕悠返幕瘜W(xué)性質(zhì)改變流動(dòng)相或柱子

③樣品與檢測器不匹配。根據樣品化學(xué)性質(zhì)調整波長(cháng)或改換檢測器

④檢測器衰減太多。調整衰減即可。

⑤檢測器時(shí)間常數太大。解決辦法為降低時(shí)間參數

⑥檢測器池窗污染。解決辦法為清洗池窗。

⑦檢測池中有氣泡。解決辦法為排氣。

⑧記錄儀測壓范圍不當。調整電壓范圍即可。

⑨流動(dòng)相流量不合適。調整流速即可。

⑩檢測器與記錄儀超出校正曲線(xiàn)。解決辦法為檢查記錄儀與檢測器，重作校正曲線(xiàn)。

2.液相色譜中峰出現拖尾或出現雙峰的原因是什么？

①篩板堵塞或柱失效，解決辦法是反向沖洗柱子，替換篩板或更換柱子。

②存在干擾峰，解決辦法為使用較長(cháng)的柱子，改換流動(dòng)相或更換選擇性好的柱子

③可能柱超載，減少進(jìn)樣量。

3.為何出現峰展寬？

①樣品體積過(guò)大——用流動(dòng)相配樣,總的樣品體積小于*峰的15%

②在進(jìn)樣閥中造成峰擴展——進(jìn)樣前后排出氣泡以降低擴散

③數據系統采樣速率太慢——設定速率應是每峰大于10點(diǎn)

④檢測器時(shí)間常數過(guò)大——設定時(shí)間常數為感興趣*峰半寬的10%

⑤流動(dòng)相粘度過(guò)高——增加柱溫,采用低粘度流動(dòng)相

⑥檢測池體積過(guò)大——用小體積池,卸下熱交換器

⑦保留時(shí)間過(guò)長(cháng)——等度洗脫時(shí)增加強溶劑含量,也可用梯度洗脫

⑧柱外體積過(guò)大——將連接管徑和連接管長(cháng)度降至zui小

⑨樣品過(guò)載——進(jìn)小濃度小體積樣品

4.如何簡(jiǎn)單判斷比例閥是否內漏？

設定泵使用一個(gè)單獨通路（A），打開(kāi)Purge閥，流速5mL/min，提起其他溶劑瓶?jì)鹊娜軇┻^(guò)濾頭直至離開(kāi)液面，觀(guān)察這些通路（B、C、D）內的溶劑是否隨著(zhù)流動(dòng)，正常時(shí)均不應流動(dòng)。

5.做HPLC分析時(shí)，柱壓不穩定，如何解決？

①泵內有空氣，解決的辦法是清除泵內空氣，對溶劑進(jìn)行脫氣處理；

②比例閥失效，更換比例閥即可；

③泵密封墊損壞，更換密封墊即可；

④溶劑中的氣泡，解決的辦法是對溶劑脫氣，必要時(shí)改變脫氣方法；

⑤系統檢漏，找出漏點(diǎn)，密封即可；

⑥梯度洗脫，這時(shí)壓力波動(dòng)是正常的。

6.購買(mǎi)的HPLC柱驗收測試時(shí)柱壓過(guò)高，請問(wèn)為什么？

柱壓過(guò)高是HPLC柱用戶(hù)zui常碰到的問(wèn)題。其原因有多方面，而且常常并不是柱子本身的問(wèn)題，您可按下面步驟檢查問(wèn)題的起因：

①拆去保護預柱，看柱壓是否還高，否則是保護柱的問(wèn)題，若柱壓仍高，再檢查；

②把色譜柱從儀器上取下，看壓力是否下降，否則是管路堵塞，需清洗，若壓力下降，再檢查；

③將柱子的進(jìn)出口反過(guò)來(lái)接在儀器上，用10倍柱體積的流動(dòng)相沖洗柱子，（此時(shí)不要連接檢測器，以防固體顆粒進(jìn)入流動(dòng)池）。這時(shí)，如果柱壓仍不下降，再檢查；只用于使用過(guò)的柱子。

④更換柱子入口篩板，若柱壓下降，說(shuō)明您的溶劑或樣品含有顆粒雜質(zhì)，正是這些雜質(zhì)將篩板堵塞引起壓力上升。若柱壓還高，請與廠(chǎng)商。一般情況下，在進(jìn)樣器與保護柱之間接一個(gè)在線(xiàn)過(guò)濾器便可避免柱壓過(guò)高的問(wèn)題。

7.色譜柱中的流動(dòng)相會(huì )排干嗎？

   不少做色譜分離試驗的人遇到過(guò)這樣的情形：不慎未及時(shí)補充流動(dòng)相，泵將溶劑瓶中的流動(dòng)相吸干了，HPLC系統由此而停止工作了。如此情況是否會(huì )損壞色譜柱？泵是否已將色譜柱中所有流動(dòng)相都排干了？色譜柱還能使用嗎？事實(shí)上，如果泵將溶劑瓶中的流動(dòng)相吸干，并不會(huì )造成色譜柱的損壞。即使泵中充滿(mǎn)了空氣，泵也不會(huì )將空氣排入色譜柱。因為泵只能輸送液體，而不能輸送空氣。

   相比之下，另一個(gè)更可能發(fā)生的情況是忘記蓋上色譜柱兩端的密封蓋或蓋子太松而使色譜柱變干。同樣，整個(gè)色譜柱干涸的情況不太容易發(fā)生，多半可能只是色譜柱兩端的幾個(gè)毫米變干了，因揮發(fā)掉所有溶劑是色譜柱變干需要相當長(cháng)的時(shí)間。即使色譜柱真的變干了，也不一定就不可救藥了?？梢試L試用一種*脫氣的、表面張力低的溶劑（如，經(jīng)氦氣脫氣的甲醇）沖洗色譜柱以除去氣體。較低的表面張力有助于浸潤填料表面；已脫氣的溶劑應該能夠溶解并去除滯留在填料中的氣體。色譜柱大約需要（以1mL/min的流速）沖一個(gè)小時(shí)或更多的時(shí)間被*浸潤，恢復到正常狀態(tài)。

8.除了在線(xiàn)脫氣，常用的實(shí)驗室脫氣方式還有哪些？

   加熱回流脫氣，脫氣效果*，但無(wú)法保持；氦脫氣，此方法脫氣效果佳，能除去百分之九十以上的空氣，但氦氣價(jià)格太貴，所以用的不多；真空脫氣，效果僅次于氦脫氣，但脫氣過(guò)程中容易造成樣品溶液揮發(fā)損失；超聲脫氣，只能脫去約百分之三十的空氣，但在實(shí)驗室中zui常用。目前還是盡量爭取用在線(xiàn)脫氣，方便且效果好。