色譜法是生命科學(xué)、材料科學(xué)、環(huán)境科學(xué)等科學(xué)領(lǐng)域的重要分析手段,在藥物分析中有著(zhù)極為重要的地位,各國藥典都收載了許多藥物的色譜分析方法?!吨腥A人民共和國藥典》2015年版也不例外:收載了上千個(gè)藥品用色譜法進(jìn)行純度檢查、定性鑒別或含量測定。
色譜柱中固定不變的物質(zhì)是固定相,攜帶樣品向前流動(dòng)的是流動(dòng)相,色譜類(lèi)型較多,從不同角度可以有不同的分類(lèi)方法:
色譜法分類(lèi):
1、按流動(dòng)相和固定相所處狀態(tài)分類(lèi):
流動(dòng)相為氣體的稱(chēng)為氣相色譜,流動(dòng)相為液體的稱(chēng)為液相色譜。固定相為固體的可分為氣固色譜(GSC)或液固色譜(LSC),固定相為液體的有氣液色譜(GLC)或液液色譜(LLC)。
2、按固定相的形態(tài)分類(lèi):可分為柱色譜法、平面色譜法,如,紙色譜法、薄層色譜法等。
3、按分離過(guò)程的機制分類(lèi):可分為分配色譜法、吸附色譜法、離子交換色譜法和空間排阻色譜法等類(lèi)型,后兩者只存在于 液相色譜中。
另外,還有其他分離機制的色譜方法,如,毛細管電泳法,根據組分的電泳速度差異而實(shí)現分離。
色譜流出曲線(xiàn)與有關(guān)概念
(一)色譜流出曲線(xiàn)和色譜峰:
1、色譜流出曲線(xiàn):在色譜分析中,樣品流經(jīng)色譜柱和檢測器,所得到的信號-時(shí)間曲線(xiàn),稱(chēng)為色譜流出曲線(xiàn)(elution profile),又稱(chēng)色譜圖。
2、基線(xiàn):在操作條件下,沒(méi)有組分流出、僅有流動(dòng)相通過(guò)檢測器系統時(shí)所形成的流出曲線(xiàn)。穩定的基線(xiàn)應是一條平行于橫軸的直線(xiàn)?;€(xiàn)反映儀器(主要是檢測器)的噪聲隨時(shí)間的變化。
3、色譜峰:流出曲線(xiàn)上的突起部分,正常的色譜峰為正態(tài)分布曲線(xiàn),曲線(xiàn)有zui高點(diǎn),以此點(diǎn)的橫坐標為中心,曲線(xiàn)對稱(chēng)的向兩側快速、單調下降。
一種組分的色譜峰可用峰高或峰面積(用于定量)、峰位(用保留值表示,用于定性)及峰寬(用于衡量柱效)說(shuō)明。
(二)保留值:
1、保留時(shí)間(retention time):色譜圖橫軸上從進(jìn)樣開(kāi)始到某個(gè)組分的色譜峰頂點(diǎn)的時(shí)間間隔為該組分的保留時(shí)間。
2、死時(shí)間:不被固定相保留的組分,從進(jìn)樣到出現峰極大值時(shí)的時(shí)間間隔。
3、調整保留時(shí)間:組分被固定相滯留的時(shí)間。
4、保留體積:從進(jìn)樣開(kāi)始到某個(gè)組分在柱后出現濃度極大時(shí),所需通過(guò)色譜柱的流動(dòng)相體積,單位為mL。
5、死體積:不被固定相保留的組分通過(guò)色譜柱所消耗的流動(dòng)相的體積。
6、調整保留體積:保留體積減死體積。
7、相對保留值:兩組分的調整保留值之比,也是色譜系統的選擇性指標。
(三)色譜峰高和峰面積:
1、峰高(peak height, h):色譜峰頂點(diǎn)至基線(xiàn)的距離。
2、峰面積(peak area, A):色譜曲線(xiàn)與基線(xiàn)間包圍的面積。
(四)色譜峰區域寬度:
1、標準差:正態(tài)色譜流出曲線(xiàn)上兩拐點(diǎn)間距離之半。
2、半峰寬:峰高一半處的峰寬。
3、峰寬:通過(guò)色譜峰兩拐點(diǎn)作切線(xiàn)在基線(xiàn)上所截得的距離。
(五)分離度:又稱(chēng)分辨率或分辨度,它是色譜圖中相鄰兩峰分離程度的量度。
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